Микроскопические методы диагностики гельминтозов, или зачем нужен анализ кала на яйца гельминтов?

Перед пациентами часто встают вопросы о том, как правильно сдать анализ кала на яйца глист, куда собрать материал для исследования, где и как его хранить, а также можно ли с уверенностью говорить об отсутствии гельминтов при отрицательном его результате. Однако, не все так просто.

Что же такое гельминтозы? Это группа заболеваний у человека, животных и растений, которые вызываются паразитическими червями (гельминтами) и продуктами их жизнедеятельности в организме их хозяина.

По данным, приведенным Всемирной Организацией Здравоохранения (ВОЗ), паразитозы стойко удерживают четвертую позицию по наносимому здоровью человечества ущербу по всему миру. Считается, что ежегодно заражению паразитическими червями, принадлежащих к одному из трех основных классов, подвергается каждый второй житель на планете.

Определить точное количество инфицированных в России практически невозможно, связанно это с самолечением, отсутствием обращений населения за медицинской помощью и массовой диспансеризации. Мнение экспертов сводится к тому, что в России заражены гельминтами более 20 миллионов человек.

Всего на данный момент времени известно около двухсот пятидесяти видов гельминтов, паразитирование которых возможно в теле человека, животных или растениях. На территории стран СНГ и в том числе Российской Федерации наиболее часто встречаются около 30 видов.

Основными паразитами человека являются представители следующих классов: нематоды, цестоды, трематоды. Крайне редко встречаются у человека классы гельминтов: кольчатые черви (Annelida) и скребни (Acanthocephalia). Поэтому в данном материале они не будут рассматриваться подробно.

Активное развитие туризма, а также усиление миграции приводят к тому, что число обнаруживаемых видов гельминтов на территории Российской Федерации прогрессивно увеличивается, при этом нередко можно встретить виды нехарактерные для территории нашей страны [1,2,3,4].

Жизненный цикл паразитических червей состоит из нескольких стадий, у основного большинства гельминтов он одинаков: из яйца в личинки, а затем во взрослую особь.

Выделяют три группы, которые отличаются друг от друга путем распространения и циклом развития.

Контактным гельминтам (имеют самый простой цикл развития) для перехода из одной стадии в другую не требуется промежуточный хозяин, они выделяют в окружающую среду практически зрелые или зрелые яйца, которые продолжают свое развитие, попав непосредственно на тело своей жертвы или на его одежду. Инвазивная форма - собственно яйца. Представителем данной группы является Enterobius vermicularis (острица) и др.

Геогельминты развиваются в земле до стадии личинки или зрелого яйца, в своем развитии не нуждаются в промежуточном хозяине, попадают в организм окончательного хозяина через загрязненные овощи, либо при контакте с зараженной землей. Представители данной группы: Trichocephalus trichiurus (власоглав), Ascaris lumbricoides (человеческая аскарида), Ancylostoma duodenale (анкилостома) и др.

Биогельминты имеют самый сложный цикл своего развития. Данная группа паразитов, прежде чем попасть в организм окончательного хозяина, должна пройти развитие в теле промежуточного хозяина. За жизненный цикл они могут сменить несколько промежуточных хозяев. Окончательный хозяин заражается, употребив в пищу инфицированного промежуточного хозяина. Представители: Таеniarhynchus sagitanus (бычий цепень), Таеnia solium (свиной цепень) и др.

Клинические проявления гельминтозов очень разнообразны и напрямую зависят от органов-мишеней и локализации паразитов. Частыми внеорганными проявлениями являются аллергические реакции, усталость, вялость, недомогание.

Таблица сравнения источников заражения, локализации и методов лабораторной диагностики в зависимости от вида гельминта приведена ниже [5,9].

Таблица 1 - Методы лабораторной диагностики при разных видах глистных инвазий

Лабораторная диагностика гельминтозов [6,9]

В настоящее время для диагностики гельминтозов применяются следующие методы: макроскопические и микроскопические (являются прямыми методами), серологические методы диагностики, ПЦР, УЗИ, рентгенологические методы и др.

Макроскопия

Макроскопический метод - это осмотр подготовленного материала невооруженным глазом или при помощи лупы. Применяется перед микроскопией полученного субстрата, предназначен для контроля за эффективностью проводимого лечения, а также для дифференциального диагноза при обнаружении частей цестод. Является достоверным при обнаружении члеников свиного и бычьего цепней, обрывков широкого лентеца и др.

Микроскопические методы исследования

Микроскопические методы исследования позволяют обнаружить яйца глистов (гельминтов) и личиночные формы в исходном субстрате. В качестве материала для микроскопии могут быть использованы  кал, соскобы с перианальных складок, мокрота, кусочки мышечной ткани, содержимое желчного пузыря и др. Врач лабораторной диагностики в зависимости от предполагаемого диагноза выбирает один или несколько методов микроскопии.

Изучение кала под микроскопом с целью обнаружения яиц гельминтов называется копроовоскопией ("копрос" - кал, "овум" - яйцо, "скопео" -смотрю). Изучение материала, полученного от больного, под микроскопом с целью выявления в нем личинок гельминтов называется ларвоскопией ("ларва" - личинка).

Копроовоскопия (исследование кала на яйца глист)

В таблице 5 приведены различные модификации копроовоскопии. Метод Като-Миура (исследование толстого мазка фекалий под целлофаном) является самым простым, не требует значительных усилий и сложного оснащения лаборатории. Именно этот метод обычно используется при скрининговых анализах (например, при поступлении ребенка в детский сад, школу, ВУЗ, получении медицинской книжки декретированными слоями населения, оформлении на санаторно-курортное лечение или в стационар и так далее).

При подозрении на гельминтоз помимо метода Като-Миура врач-лаборант всегда использует так называемые методы обогащения (седиментации и флотации). Применение реагентов для осаждения или всплывания яиц гельминтов способствует их обнаружению даже при малой степени инвазии.

Таблица 2 - Методы овоскопии

Используются также количественные методы копроовоскопии. Данными методами определяют количество яиц глистов в 1 г. исследуемого материала, что позволяет приблизительно судить о степени инвазии гельминтами и эффективности проводимого лечения. Количественными могут быть метод толстого мазка под целлофаном по Като-Кац (измененный Като и Миура) и методы формалин-эфирного и уксусно-эфирного осаждения.

Информативность однократного исследования кала на яйца глист невелика, по разным оценкам около 30-50%. Этого вполне достаточно для выявления лиц с массивной инвазий при скрининге, однако порой недостаточно для постановки диагноза. Поэтому лечащий врач при подозрении на гельминтоз назначает как минимум 3 исследования с интервалом 7-10 дней между ними.

Копроларвоскопия (исследование фекалий на личинки гельминтов)

Иные способы овоскопии и ларвоскопии

Для обнаружения яиц остриц (Enterobius vermicularis) и бычьего цепня (Таеniarhynchus sagitanus) широко используется микроскопия соскобов с перианальной области. Сдать один из вариантов соскоба можно непосредственно в лаборатории или, получив необходимые для исследования пробирки и шпатели, произвести соскоб самостоятельно в домашних условиях с последующей сдачей исследуемого материла в лабораторию. О том, как правильно сдать соскоб на энтеробиоз, мы писали в соответствующей статье.

Эффективность всех методов соскоба с перианальных складок в диагностике гельминтозов примерно одинаковы, выбор метода зависит от наличия тех или иных средств для забора мазка.

Для диагностики гельминтозов также используют микроскопию содержимого двенадцатиперстной кишки. Желчь в лабораторию для исследования желательно доставить непосредственно после ее забора. Для обнаружения Strongyloides stercoralis (кишечной угрицы) используют исследование нативного (без окраски и обработки какими-либо реактивами) мазка.

Для обнаружения яиц трематод (Opisthorchus felineus, Clonorchis sinensis, Fasciola hepatica, Dicrocoelium lancealum) применяется метод центрифугирования желчи с последующей микроскопией.

Для обнаружения гельминтов, паразитирующих в легких (Paragonimus westermani, Thominx aerophilus) используют микроскопический анализ мокроты. Микроскопия осуществляется методом нативного мазка и методом центрифугирования с последующей визуализацией осадка. Данный метод так же позволяет обнаружить личинки кишечных нематод (Ascaris lumbricoides, Ancylostoma duodenale, Strongyloides stercoralis) в период их миграции из легких в кишечник. В редких случаях микроскопия мокроты позволяет распознать эхинококков в стадии личинки при условии их локализации в легких, а также при прорыве эхинококковой кисты в бронх.

Для обнаружения гельминтов (трихинелл) может использоваться биопсия поперечнополосатой мышечной ткани. Для изучения используют биоптат двуглавой или икроножной мышц, микроскопию желательно произвести непосредственно после забора материала. Применяется компресионная трихинеллоскопия и трихинеллоскопия методом искусственного переваривания в желудочном соке.

Для диагностики гельминтозов также возможно использование полимеразной цепной реакции, субстратом для которой являются кровь, моча, кал и др. Сложности в использовании этого метода связанны с малым количеством лабораторий, аккредитованных производить такие анализы. ПЦР позволяет обнаружить в исследуемом материале ДНК гельминта вне зависимости от того, жив он или нет.

Исходя из вышесказанного, мы видим, что для эффективной диагностики гельминтоза важно выбрать правильную методику, т.к. не всех гельминтов можно обнаружить при исследовании каловых масс.

Как правильно произвести сбор кала для анализа на яйца гельминтов?

Теперь разберем, как правильно сдавать анализ кала на яйца глист (на яйца гельминтов). Перед сдачей данного вида анализа какой-либо специальной подготовки не требуется. Для исследования не пригоден кал после очистительных клизм, ректальных свечей, применения слабительных средств.

1. 1Желательно отобрать образцы кала из различных участков каловых масс (снизу, сверху, с разных боков, из внутренней части) при соблюдении этого правила результат анализа будет более информативен. Если в полученном материале есть видимые на глаз паразиты или их части, их тоже следует сложить в контейнер. Минимально допустимый для исследования объем собранного материала составляет приблизительно две чайные ложки (приблизительный размер 2*2,0 см или 3*3,0 см) или примерно 3 миллилитра, меньшее количество субстрата нежелательно.
2. 2Для сбора исследуемого материала необходима непроницаемая, плотно закрывающаяся тара, можно использовать специальные контейнеры для анализов кала (очень удобны, т. к. имеется ложечка для отбора материала), которые в широком доступе продаются в аптеках. Также можно собрать исследуемый материал «по старинке», в спичечный коробок. Контейнер для сбора материала не должен быть обязательно стерильным. Достаточно его чисто вымыть.
3. 3Кал не должен быть обязательно свежим (есть исключения, которые будут обговорены ниже), однако, исследование свежих образцов более информативно.
4. 4Нежелательно наличие посторонних примесей в исследуемом материале (мочи, выделений из влагалища), в связи с этим перед сбором материала настоятельно рекомендуется мочевой пузырь опустошить (помочиться). Женщинам во время менструации необходимо воспользоваться тампоном, а после этого приступить к сбору материала для исследования.
5. 5Если кал нужно собрать у ребенка, то материал можно взять из подгузника или детского горшка.
6. 6Возможно хранение полученного в ходе отбора материала в холодильнике (плотно закрытым) при температуре от 0 до +4 оС, по некоторым литературным источникам до +8 оС, не более одних суток, температура ниже/выше может негативно сказаться на интерпретации полученных данных.
7. 7Если известно, что материал в лабораторию попадет позднее, чем через 24 часа, то сбор материала производят в специальный консервант. Если есть возможность, все-таки рекомендуется сдать утреннюю порцию кала. Контейнер с полученным материалом необходимо подписать (фамилия, имя, отчество, дата сбора материала).
8. 8Следует учесть, что разовой сдачи анализа может быть недостаточно, поэтому количество сборов материала может доходить до шести и более раз (в среднем трехкратно).

Варианты приготовления наиболее простых растворов консерванта для хранения проб кала приведены в таблице ниже.

В данных консервантах полученный материал можно хранить до 2-3 недель. Для сбора подготовленного кала в консервант следует соблюдать соотношение: одна часть кала к трем частям выбранного консерванта.

Правила забора соскоба с перианальных складок

Если вам нужно сдать соскоб с перианальных складок, то это можно сделать в домашних условиях или непосредственно в поликлинике. Для получения материала в домашних условиях необходимо предварительно взять в поликлинике необходимые для этого приспособления (наборы, шпатели, пробирки), можно воспользоваться ватной палочкой, которая будет предварительно смочена в теплой воде или физрастворе (0,9% раствор NaCl).

Процедуру сбора материала проводят утром сразу после пробуждения, перед началом манипуляций не нужно проводить гигиену промежности, в туалет «по-большому» ходить тоже не нужно. Ватной палочкой протирают складки кожи вокруг анального отверстия. Для достоверности забор материала нужно производить сразу в нескольких местах. Готовый материал на ватной палочке помещают в контейнер или пробирку, плотно упаковывают. После сбора в течении двух часов материал для исследования следует доставить в лабораторию. Не забудьте подписать контейнер. Читать подробнее о модификациях классического соскоба на энтеробиоз можно здесь.

Результат исследования материала, как правило, будет готов в течении одного рабочего дня и уже на следующий день вы можете получить ответ, но некоторые лаборатории могут готовить результаты дольше.

Если в исследуемом материале не обнаружены яйца гельминтов или их личинки, то на бланке результата будет написано: «Яйца глист не обнаружены», в остальных случаях будет написано какой вид гельминтов обнаружен. [7,8,9]

Таким образом, пациентам важно помнить:

1. 1Стандартный анализ кала на яйца глист неплохой метод массового обследования населения, в том числе декретированных групп.
2. 2Не каждый гельминтоз можно распознать с помощью стандартного исследования кала на яйца глист, в связи с этим при подозрении на глистные инвазии лучше всего обратиться к врачу и не заниматься самолечением.
3. 3Метод диагностики в каждом конкретном случае выбирает врач, основываясь на наличии тех или иных симптомов инвазии.
4. 4Результаты исследования кала на яйца глист напрямую зависят от правильности сбора материала. Если вы будете соблюдать вышеперечисленные требования, вероятность получить правильный результат будет гораздо выше.
5. 5Если вы получили ответ «Яйца глист не обнаружены», есть вероятность того, что результат ложноотрицательный. В этом случае лечащим врачом могут быть рекомендованы повторные исследования с интервалом в 7-14 дней, а также назначены другие диагностические мероприятия.

Видео Фото Таблицы

Название метода	Когда рекомендуется	Информативность	Что позволяет выявить	Специальный метод обнаружения
Метод Бермана	Стронгилоидоз	Возрастает при более длительной выдержке исследуемого материала в воде	Личинки кишечной угрицы	Стронгилоидоз (Strongyloides stercoralis)
Модификация Супряги		Высокой и средней степени интенсивности инвазии, менее эффективен при низкой интенсивности инвазии, возможно использование в сочетании с анализом содержимого двенадцатиперстной кишки
Метод культивирования личинок на фильтровальной бумаге (метод Харада-Мори в модификации Маруашвили)	Анкилостомоз		Личинки анкилостомид	Анкилостомоз (Ancylostoma duodenale)

Исследуемый материал	Обнаруживаемый паразит
Кал	Яйца аскарид, власоглава, широкого лентеца, карликового цепня, описторхид, фасциол и др. гельминтов.
Соскоб с перианальной области	яйца остриц, реже бычьего и свиного цепней
Содержимое двенадцатиперстной кишки	яйца Opisthorchus felineus, Clonorchis sinensis, Fasciola hepatica, Dicrocoelium lancealum и личинок Strongyloides stercoralis
Мокрота	Paragonimus westermani, Thominx aerophilus, личинки Echinococcosis и Alveococcosis при прорыве кисты в бронх, личинки Ascaris lumbricoides, Ancylostoma duodenale, Strongyloides stercoralis
Поперечнополосатая мышечная ткань	личинки Trichinella spiralis

Название консерванта	Способ приготовления
Раствор формалина 10%	Формалин аптечный 10,0 мл; Дистиллированная вода 90,0 мл; Смешать
Раствор глицерина 50%	Глицерин 50,0 мл; Дистиллированная вода 90,0 мл; Смешать
Этиловый спирт 70%	70% аптечный этиловый спирт