Лабораторная диагностика

  1. 1Общий анализ крови недостаточно информативен для токсоплазмоза, поэтому может использоваться только в комплексе с другими методами диагностики. Могут наблюдаться следующие изменения: снижение числа лейкоцитов (лейкопения), уменьшение числа нейтрофилов (нейтропения), относительное увеличение количества лимфоцитов (лимфоцитоз), повышение уровня эозинофилов (эозинофилия), умеренная анемия.
  2. 2Паразитологический метод. Он заключается в выявлении возбудителя при исследовании с помощью микроскопа различных сред. Ими могут быть окрашенные мазки крови, содержимое лимфатических узлов, полученное путем их пункции, спинномозговая жидкость, прошедшая центрифугирование, плацентарная ткань, а также препараты трупных материалов.
  3. 3Серологические методы - путем поиска специфических антигенов или антител в сыворотке крови исследуемого. Они основаны на реакциях иммунитета. При попадании антигенов (чужеродных веществ) возбудителя токсоплазмоза в организм человека, специальными клетками иммунной системы начинают вырабатываться антитела, способные специфически связывать соответствующие им антигены. При оценке результатов серологических методов диагностики важно принять во внимание то, что антитела на антигены паразита в организме человека вырабатываются спустя некоторое время (1-4 недели). Поэтому необходимо анализировать результаты исследований в динамике, как минимум двукратно. Именно о серологии обычно говорят как об анализе на токсоплазмоз.

Токсоплазмоз

Реакция связывания комплемента (РСК) с токсоплазменным антигеном

Данная реакция состоит из двух фаз. Первая - инкубационная. Здесь смешивают сыворотку крови исследуемого, антиген и комплемент (белковый комплекс). Во второй фазе (индикаторной) в полученную смесь добавляют эритроциты барана и гемолитическую сыворотку, в которой содержатся антитела к ним. Таким образом, происходит выявление свободного комплемента в первоначальной смеси. Возможны 2 варианта исходов.

В случае наличия антител (то есть кровь взята у больного токсоплазмозом) образуется иммунный комплекс «антиген-антитело», который фиксирует комплемент, и в последующем гемолиз (разрушение эритроцитов) не происходит. Такая реакция называется положительной.

Если использовалась сыворотка крови здорового человека, то иммунный комплекс не образуется, комплемент не связывается и во вторую фазу образует соединение с комплексом, состоящим из эритроцита барана и антиэритроцитарного антитела. Происходит гемолиз, и такая реакция будет считаться отрицательной.

Положительный результат РСК наблюдается со второй недели после инфицирования, а максимальных значений достигает к двум-четырем месяцам. Через два - три года выраженность иммунного ответа снижается.

Метод непрямой иммунофлюоресценции (РНИФ)

Этот метод заключается в обнаружении антигена в исследуемом препарате. Для этого на сыворотку крови человека наносят диагностическую кроличью сыворотку, содержащую антитела. В случае присутствия антигена образуется иммунный комплекс, а несвязавшиеся антитела отмывают.

Образовавшийся комплекс визуализируется с помощью антиглобулиновой (к кроличьим иммуноглобулинам) сыворотки, меченой флюорохромом. Такой комплекс будет наблюдаться в специальном люминесцентном микроскопе.

РНИФ будет положительной уже через неделю после начала заболевания и ко второму - четвертому месяцу достигает максимума своих значений. Низкие титры по результатам этой реакции могут обнаруживаться на протяжении нескольких лет (от 1 года до 15 лет).

РНГА и ИФА

В непрямой гемагглютинации для выявления антител в сыворотке крови пациента используется антигенный эритроцитарный диагностикум. Он состоит из эритроцитов, содержащих на своей поверхности антигены. При положительной реакции антитела взаимодействуют с антигенами, эритроциты склеиваются и выпадают на дно пробирки осадком. Отрицательная же реакция проявляется оседанием эритроцитов в виде пуговки.

ИФА - метод качественного и количественного обнаружения специфических антител или антигенов, один из самых широко используемых в наши дни. Существуют несколько разновидностей исследования. Для диагностики токсоплазмоза и выявления антител (иммуноглобулинов – IgM, IgG) используется твердофазный ИФА. Он заключается в следующем: в специальных лунках планшеток из полистирола антиген связывается со стенками. При добавлении исследуемой среды (как правило, сыворотки пациента), содержащей молекулы специфических антител, происходит образование комплекса.

Далее добавляют антиглобулиновую сыворотку (против определенного иммуноглобулина человека), меченную ферментом, и субстрат для него. После каждого этапа происходит отмывание несвязавшихся реагентов. В результате положительной реакции изменяется цвет субстрата, что обнаруживается при спектрофотометрии. Количественное содержание специфических антител, связавшихся с молекулами антигена, определяется по интенсивности окраски.

О чем свидетельствует наличие антител IgM и IgG?

Расшифровка результатов серологических реакций на токсоплазмоз требует внимания как со стороны врача, так и со стороны пациента, поскольку существует ряд нюансов, влияющих на оценку. Следует понимать, что не всегда выявление антител против токсоплазмы означает наличие инфекции.

В процессе формирования иммунного ответа организма человека на внедрение возбудителя инфекции лимфоцитами начинается выработка специфических антител: сначала это иммуноглобулины класса M, а через некоторое время и специфические IgG-антитела.

Выявление IgM сигнализирует об острой стадии токсоплазмоза. Его можно обнаружить в первые 10-15 дней болезни в сыворотке крови. Также отмечают увеличение титра IgG в 4 раза в парных сыворотках с интервалом в три-четыре недели.

При обнаружении IgG можно говорить о латентном периоде хронического токсоплазмоза, лечение которого не требуется, либо о наличии иммунной памяти у пациента о перенесенной ранее инфекции. В случае обострения хронического токсоплазмоза наблюдают увеличение титра специфических антител IgG.

Обнаружение и IgG, и IgM сигнализирует, как правило, об инфицировании, произошедшем впервые и совсем недавно, поскольку антитела класса М пропадают обычно через 3 месяца после возникновения заболевания. Но этот период достаточно индивидуален и вариабелен. Так, некоторое количество IgM-антител к Toxoplasma gondii может быть найдено через 18 месяцев и более.

Особое внимание уделяется выполнению анализов на токсоплазмоз у беременных женщин (на максимально ранних сроках) или женщин, находящихся на стадии планирования беременности. Это связано с тем, что токсоплазмоз включен в группу инфекций, имеющих большое влияние на репродуктивные возможности человека, а также рост, развитие и здоровье будущих детей.

Группа таких инфекций именуется TORCH-комплексом (аббревиатура латинских названий заболеваний: Toxoplasma, Others (сифилис, ВИЧ, гепатит В и С, ветряная оспа, хламидиоз),  Rubella (краснуха), Cytomegalovirus (цитомегаловирусная инфекция), Herpes (вирус герпеса)). Заражение впервые или обострение хронических форм этих заболеваний во время беременности может быть достаточно опасным для плода.

При выявлении у этой группы женщин только IgG особых мер не принимается, поскольку, как уже было сказано раннее, это признак ранее перенесенного токсоплазмоза и встречи с возбудителем. В случае же обнаружения IgG и IgM или только IgM необходимо пройти дополнительное обследование с помощью метода ПЦР, о котором речь пойдет ниже, или провести тест на авидность IgG-антител для выявления срока давности инфицирования.

Авидностью называют характеристику прочности связи антител с антигенами. IgG-антитела сначала недостаточно прочно связаны с антигенами, то есть имеют низкую авидность. В процессе развития ответа иммунной системы лимфоциты синтезируют всё более  высокоавидные IgG-антитела, которые имеют более прочные связи с соответствующими антигенами.

Таким образом, чем выше авидность, тем больше срок давности инфицирования. Данный тест основан на разделении антител при помощи воздействия на образовавшиеся иммунные комплексы раствором, разрушающим белок. После такой обработки низкоавидные антитела теряют связь  с антигеном, а высокоавидные – сохраняют. Это отражают индексом авидности -  отношением концентрации IgG-антител,  оставшихся связанными, к их концентрации до проведения обработки.

В таблице 1, расположенной ниже, можно посмотреть, что означают положительные антитела IgG и IgM и различные их комбинации. Положительные anti Toxoplasma gondii IgG, IgM отмечены в таблице плюсом, отрицательные - минусом.

anti Toxoplasma gondii IgGanti Toxoplasma gondii IgMПЦРЗаключение
---Человек не болен токсоплазмозом и никогда не болел
+--Латентный период хронического токсоплазмоза, наличие иммунитета против токсоплазмоза, дополнительное проведение теста на авидность IgG у беременных.
-+-Возможна ошибка в проведении анализов. Повторить ИФА и ПЦР через 2 недели.
-++Острая стадия первичного инфицирования токсоплазмозом, первые дни
+++Острая стадия токсоплазмоза
++-Относительно недавнее выздоровление, такой вариант анализов возможен от 3 до 18 месяцев после выздоровления. Необходимо дополнительное проведение теста на авидность IgG
Таблица 1 - Как оценить результаты серологических реакций на токсоплазмоз

Возможности ПЦР при токсоплазмозе

С помощью этой реакции выявляют ДНК возбудителя в крови, спинномозговой жидкости или околоплодных водах у беременных. ПЦР заключается в многократном удлинении небольшого участка ДНК с помощью ферментов в искусственных условиях. В результате получается участок, необходимый для исследования и визуального подтверждения наличия возбудителя. Метод ПЦР хорошо зарекомендовал себя, поскольку обладает большим количеством преимуществ перед другими методами, специфичность его достигает 100%.

ПЦР

Биологическая проба

При проведении пробы белым мышам внутрибрюшинно вводят плазму крови или спинномозговую жидкость исследуемого, тем самым заражая животное в случае наличия заболевания у пациента. Через 5-6 дней производят вскрытие мыши для изучения материалов органов и мазков из перитонеального экссудата (воспалительная жидкость, вырабатываемая брюшиной).

Внутрикожная аллергическая проба с токсоплазмином

Токсоплазмин - это препарат, содержащий комплекс токсоплазменных антигенов, полученных в лабораторных условиях.

Данная проба проводится следующим образом. Пациенту вводят 0,1 мл токсоплазмина шприцем в толщу кожи на поверхности предплечья, с его ладонной стороны. У людей, имеющих чувствительность к токсоплазмину, на месте введения аллергена появляется покраснение и уплотнение – инфильтрат. Реакция будет считаться положительной, если через сутки после введения диаметр образования не менее 10 мм и через двое суток не уменьшается.

Данная проба положительна с четвертой недели болезни и может сохраняться на протяжении нескольких лет. Но это еще не значит, что исследуемый пациент болен. Положительность пробы может свидетельствовать о бывшем заражении и говорит о необходимости клинических и лабораторных исследований в динамике. Данный метод диагностики достаточно специфичен.

Инструментальные методы диагностики

Клиническая диагностика токсоплазмоза достаточно затруднительна в связи с большим многообразием вариантов течения, форм проявления данного заболевания. Необходимо дифференцировать токсоплазмоз с множеством других заболеваний с подобными симптомами. Только в комплексе с другими методами диагностики можно прийти к постановке диагноза.

Основные симптомы токсоплазмоза: длительный субфебрилитет (температура тела в течение продолжительного времени в пределах 37 - 37,5 0С), симптомы хронической интоксикации, увеличение лимфатических узлов, признаки поражения сердечной мышцы, увеличение печени, селезёнки, кальцификаты (скопления кальциевых солей) в мозге и мышечных тканях, очаги хориоретинита (воспалительный процесс в сосудистой оболочке и сетчатке глаза). Различают несколько форм заболевания по преобладающему поражению определенных органов, выраженному клинически.

Инструментальные методы диагностики проводятся по показаниям в зависимости от жалоб пациента, результатов лабораторных тестов и выявленных поражений органов и тканей при объективном исследовании. Спектр их достаточно велик:

  • Рентгенологическое исследование (черепа и других пораженных органов).
  • Компьютерная и магнитно-резонансная томография (головного мозга).
  • Электрокардиография.
  • Офтальмологические исследования.
  • УЗИ печени, селезёнки.
  • УЗИ плода в динамике.

Диагностика токсоплазмоза, как и многих других заболеваний, имеющих весьма многообразные клинические проявления, затруднена. Но, имея в арсенале достаточно большое количество различных методов, а также зная эпидемиологические аспекты данного заболевания, опытный врач сможет поставить правильный диагноз и принять соответствующее решение по поводу лечения и дальнейшей диспансеризации пациента.